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小鼠体内光学成像的标记方法和实验步骤详解
2022-06-22 15:04
活体动物-小鼠体内光学成像的标记方法和实验步骤详解：活体动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶基因（Luciferase）标记细胞或DNA，而荧光技术则采用绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等荧光报告基因和FITC、Cy5、Cy7等荧光素及量子点(quantumdot，QD)进行标记。
一、活体动物体内光学成像技术主要有几种标记方法。
生物发光 | 1.荧光素酶基因标记 | 荧光素酶基因（Luciferase）标记细胞或DNA |
荧光发光 | 1.荧光蛋白标记 | 荧光蛋白适用于标记细胞、病毒、基因等，通常使用的是GFP、EGFP、RFP（DsRed） |
2.荧光染料标记 | 荧光染料标记和体外标记方法相同，常用的有Cy3、Cy5、Cy5.5及Cy7，可以标记抗体、多肽、小分子药物等 | |
3.量子点标记 | 量子点作为一类新型的荧光标记材料，其在长时间生命活动监测及活体示踪方面具有独特的应用优势。 |
二、小鼠体内光学成像的原理：
小动物活体成像技术是采用高灵敏度制冷CCD配合特制的成像暗箱和图像处理软件，使得可以直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪统一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化。操作简单、所得结果直观、灵敏度高，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等发面。肿瘤学领域：建立肿瘤模型，通过活体成像技术可以测量肿瘤的生长、转移以及对药物的反应，使肿瘤学更接近临床的发病的微观环境。相比传统方法，不仅灵敏度提高（检测到微小肿瘤病灶），而且适合于肿瘤体内生长的定量分析，避免由于宰杀老鼠而造成的组间差异。药物研究：通过活体成像技术可研究与药物代谢有关的基因，药物作用通路以及药物的靶向脏器和体内分布规律。